中國倉鼠 卵巢細胞（CHO-S）

中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)
細胞介紹
貼壁生長及懸浮生長均可（用于蛋白表達時，應使用懸浮生長狀態，此時細胞生長狀態更好，比表面積更高，生物反應器中的傳質、傳熱效率更高，同時也可提高生物反應器空間使用效率。工業上大規模生產單抗，重組蛋，大部分使用懸浮培養法來生產）
 
細胞特性
1  來源：中國倉鼠
2  形態 ：成纖維細胞樣
3  含量：>1x10 6 個/mL
4  污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5  規格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
 
運輸和保存 ：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
 
中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)細胞用途：僅供使用。
細胞培養步驟
一． 培養基 及 培養 凍存 條件準備：
1）培養基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)備注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 請按照培養基配制說明書配制，L-谷氨酰胺配制濃度為 200mM，工作濃度為 8mM（即稀釋 25 倍，如 500ml CHO Serum-freMedium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗結團劑使用為 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗結團劑）
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞 處理 ：
傳代、轉染、建庫及實驗室規模小試方法：賽百慷（上海）生物技術股份有限公司提供的 CHO-S 細胞為已馴化的細胞，具有良好的適應懸浮生長及適應無血清培養基生長特性。
傳代 方法：
1.10cm 皿中培養：使用計數器（計數器或者血球計數板計數）計數，接種密度為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提前 37℃預熱的新鮮培養基中（建議培養基取 7-8ml，此時細胞生長狀態較好），置于搖床上生長，轉速為 120-130rpm，濕度為 70-80%，5%二氧化碳，溫度為 37℃。
2.培養約 2-3 天，細胞密度達到 1×10 6 個活細胞/ml 時，應 1000rpm，25℃離心5min，離心后計數（此時應稀釋），然后接種密度為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提前 37℃預熱的新鮮培養基中。細胞數目足夠時，可凍存。也可選擇 125ml 或者 250ml 搖瓶中培養細胞。（注意細胞培養液體積一般在總體積的五分之一，如在 125ml 搖瓶中加入 25ml 培養物，應注意在搖瓶中培養細胞時應將瓶蓋稍微擰松，以便于氣體交換，同時也不宜擰得過松，防止細胞污染）
轉染 方法：
在連續 5 代細胞密度未超過 2×10 6 個活細胞/ml 時，可以使用 FreeStyle Max 轉染試劑（Gibco，貨號：16447）在 CD CHO Serum-free Medium 中直接轉染。（注
意：Anti-Clumping Agent 會干擾 FreeStyle Max 轉染試劑轉染效率，同時也會干擾其他脂質體型轉染試劑的轉染效率）
建庫方法 ：
若需要建庫，可將細胞接種于 125ml 搖瓶中（接種密度為 3×10 5 個細胞/ml，總體積為 25ml），此方法同樣適用于穩定表達所需要蛋白的細胞株的建庫工作。建庫時，需要先建初級庫（master bank）（一般為 10 支，每支細胞總數不少于 4.5×10 7 個細胞），此步驟結束后，從凍存的初級庫中取出一支復蘇，按照同樣步驟建次級庫（working bank）（相同的，一般為 10 支，每支細胞總數不少于 4.5×10 7個細胞）。實驗室 規模小試方法：將挑選出的穩定細胞株從 96 孔板到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿中逐級擴大培養后（此時需要注意在培養過程中應及時保種，以防止后續步驟出現污染，及應對可能的表達量衰退現象）以 3×10 5 個細胞/ml 接種于 125ml 搖瓶中，轉速為120-130rpm，溫度為 37℃，濕度為 70-80%，連續培養一周，每天取樣做出相應的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，可根據實際情況，每天取樣測出培養基中葡萄糖含量，以便決定是否要補加葡萄糖，同時可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作為細胞發酵中補料，同時做出相應的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，為中試放大補料添加做出合理數據支持。
 
中國倉鼠 卵巢細胞(CHO-S)注意事項：
1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。